2018 ВИР и БИОТ ВЕТ л.з. (методичка)
.pdfМИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«РЯЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙУНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ П.А. КОСТЫЧЕВА»
(ФГБОУ ВО РГАТУ)
ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ
Вологжанина Е. А.
ВИРУСОЛОГИЯ И БИОТЕХНОЛОГИЯ
УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ
для лабораторных занятий
для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии по специальности 36.05.01 Ветеринария, специализация «Ветеринарная фармация»
квалификация Ветеринарный врач очной / заочной форм обучения
Рязань
2017
Учебно-методические указания для лабораторных работ составлены с учетом требований федерального государственного образовательного стандарта высшего образования по специальности 36.05.01 Ветеринария, утвержденного приказом № 962 Министерства образования и науки Российской Федерации от 03 сентября 2015 г.
Разработчик: доцент |
|
кафедры эпизоотологии, микробиологии |
|
и паразитологии, к.в.н. |
Вологжанина Е. А. |
Рассмотрены и утверждены на заседании кафедры эпизоотологии, микробиологии и паразитологии 29 августа 2017 года, протокол № 1
Заведующий кафедрой эпизоотологии, |
|
микробиологии и паразитологии, доцент |
Кондакова И. А. |
Одобрено учебно-методической комиссией факультета ветеринарной медицины и биотехнологии 31 августа 2017 года, протокол № 1
Председатель учебно-методической комиссии |
|
по специальности 36.05.01 Ветеринария, доцент |
Кулаков В. В. |
2
|
СОДЕРЖАНИЕ |
|
ВВЕДЕНИЕ |
|
5 |
1 ТРЕБОВАНИЯ К УРОВНЮ ОСВОЕНИЯ ДИЦИПЛИНЫ |
8 |
|
2 ТЕМЫ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ |
9 |
|
|
Раздел 1. Общая вирусология |
|
Тема 1.1. |
Правила работы с вируссодержащим материалом. Правила |
9 |
|
и методы получения и транспортировки вируссодержащего |
|
|
материала от больных животных и трупов |
|
Тема 1.2. |
Индикация вирусов в патологическом материале путем об- |
25 |
|
наружения вирионов и телец-включений |
|
Тема 1.3. |
Лабораторные животные и их использование в вирусологии |
29 |
Тема 1.4. |
Куриные эмбрионы и их использование в вирусологии |
42 |
Тема 1.5. |
Культуры клеток, их получение и использование в вирусоло- |
53 |
|
гической практике |
|
Тема 1.6. |
Титрование вирусов |
71 |
Тема 1.7. |
Коллоквиум № 1 (тельца-включения, патологический мате- |
86 |
|
риал, лабораторные животные, куриные эмбрионы, куль- |
|
|
туры клеток) |
|
Тема 1.8. |
Реакция нейтрализации (РН) и реакция диффузной преци- |
87 |
|
питации (РДП) |
|
Тема 1.9. |
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА), реакция |
98 |
|
непрямой гемагглютинации (РНГА) |
|
Тема 1.10. Метод флуоресцирующих антител (МФА) |
107 |
|
Тема 1.11. Иммуноферментный анализ (ИФА) |
116 |
|
Тема 1.12. Метод ДНК-зондов |
123 |
|
Тема 1.13. |
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) |
129 |
Тема 1.14. |
Коллоквиум № 2 по серологическим реакциям |
136 |
|
Раздел 2. Частная вирусология |
|
Тема 2.1. |
Лабораторная диагностика бешенства |
137 |
Тема 2.2. |
Лабораторная диагностика оспы |
155 |
|
3 |
|
Тема 2.3. |
Определение вируса ящура в реакции связывания компле- |
160 |
|
|
мента (РСК) |
|
|
Тема 2.4. |
Дифференциация вирусов Ньюкаслской болезни и гриппа |
173 |
|
|
птиц |
|
|
|
Раздел 3. Общая биотехнология |
|
|
Тема 3.1. |
Основы и методы культивирования микроорганизмов- |
178 |
|
|
продуцентов |
|
|
Тема 3.2. |
Приготовление питательных сред, посев микроорганизмов |
196 |
|
|
их подсчет |
|
|
|
Раздел 4. Частная биотехнология |
|
|
Тема 4.1. Современная классификация биопрепаратов |
207 |
||
Тема 4.2. |
Диагностические препараты |
217 |
|
Тема 4.3. Биотехнология изготовления вакцин |
219 |
||
Тема 4.4. |
Биотехнология изготовления гипериммунных сывороток и |
224 |
|
|
иммуноглобулинов |
|
|
3 ФОРМА ПРОМЕЖУТОЧНОГО КОНТРОЛЯ ЗНАНИЙ СТУДЕНТОВ |
229 |
||
СПИСОК РЕКОМЕНДОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ |
230 |
||
Основная литература |
230 |
||
Дополнительная литература |
230 |
||
Периодические издания |
231 |
||
Перечень ресурсов информационно-телекоммуникационной сети |
231 |
||
«Интернет» |
|
|
|
4
ВВЕДЕНИЕ
Учебно-методическое пособие для лабораторных работ предназначено для студентов третьего курса очной и заочной форм обучения факультета ветеринарной медицины и биотехнологии по специальности 36.05.01 Ветеринария квалифика-
ция Ветеринарный врач по дисциплине «Вирусология и биотехнология». Учебно-
методическое пособие включают в себя несколько разделов: введение, темы для лабораторных работ, цели и содержание лабораторных занятий, форма промежу-
точного контроля знаний студентов, список рекомендованной литературы.
Цель изучения учебной дисциплины - это овладение теоретическими основа-
ми вирусологии и приобретение знаний и навыков профилактики и диагностики вирусных болезней животных, а также возможность дать студентам теоретиче-
ские знания и практические навыки по основным промышленным методам произ-
водства биопрепаратов, выявления, выделения, разделения, очистки и конструи-
рования биологически активных веществ, а также создания новых активных форм организмов, отсутствующих в природе.
Задачи учебной дисциплины:
1. Изучение особенностей биологии вирусов и взаимодействия их с заражае-
мым организмом.
2. Усвоение основных принципов диагностики вирусных болезней живот-
ных.
3. Овладение современными вирусологическими методами лабораторной ди-
агностики.
4. Ознакомление с природой и многообразием биотехнологических процес-
сов, достижениями биотехнологии в области ветеринарии.
5.Изучение технологии получения производственных питательных сред для культивирования различных микроорганизмов.
6.Изучение условий, влияющих на скорость микробиологических процессов,
рост и развитие микробных популяций.
7. Оптимизация микробного процесса.
5
8. Отработка практических навыков по выделению производственных штам-
мов микроорганизмов, их селекции, хранения, использования для промышленного изготовления вакцин и антигенов.
9. Изучение технологии приготовления терапевтических и диагностических сывороток, гамма-глобулинов, пробиотиков, антибиотиков, ферментов и витами-
нов.
10.Изучение технологии получения рекомбинантных ДНК, генно-
инженерных вакцин и моноклональных антител и их использования в ветеринар-
ной медицине.
11. Изучение методов контроля, стандартизации и сертификации биопрепа-
ратов и аттестации производственных линий.
12. Изучение устройства основного производственного оборудования для приготовления питательных сред и лекарственных форм препаратов; ознакомле-
ние с подразделениями биопредприятий, организаций и управлением биологиче-
ским производством с использованием современной электронной техники.
13. Изучение перспективных и экологически безопасных технологических процессов, основанных на использовании микроорганизмов.
Дисциплина «Вирусология и биотехнология» является дисциплиной базовой части (Б1.Б.21) и преподается на третьем курсе в шестом семестре. Студент дол-
жен иметь представление о принципах и закономерностях проведения общих ви-
русологических исследований при изучении природы, строения и физико-
химических свойствах вирусов, их культивирования в условиях лаборатории, во-
просы современной классификации вирусов, патогенеза, иммунитета, лаборатор-
ных методов диагностики отдельных вирусных болезней и их специфическую профилактику.
Предшествующие дисциплины: биологическая химия, иммунология, биоло-
гия с основами экологии, ветеринарная микробиология и микология, латинский язык.
Последующие дисциплины: эпизоотология и инфекционные болезни, патоло-
гическая анатомия и судебно-ветеринарная экспертиза, организация ветеринарно-
6
го дела, заразные болезни мелких животных и птиц, ветеринарно-санитарная экс-
пертиза.
Область профессиональной деятельности: сохранение и обеспечение здоро-
вья животных и человека, профилактику особо опасных болезней животных и че-
ловека, улучшение продуктивных качеств животных, диагностику и профилакти-
ку болезней различной этиологии, лечение животных, судебно-ветеринарную экс-
пертизу, ветеринарно-санитарную экспертизу, государственный ветеринарный надзор, разработку и обращение лекарственных средств для животных.
Объекты профессиональной деятельности: сельскохозяйственные, домаш-
ние, лабораторные, экзотические, дикие и промысловые животные, птицы, пчелы,
рыбы, гидробионты и другие объекты морского и речного промысла, клеточные культуры, микробиологические и вирусные штаммы, сырье и готовая продукция животного и растительного происхождения, продукция пчеловодства, корма и кормовые добавки, места их заготовки и хранения, лекарственные средства и био-
логические препараты, технологические линии по производству препаратов, про-
дуктов и кормов, помещения для содержания животных, пастбища, водоемы,
убойные пункты, скотомогильники, транспортные средства для перевозки живот-
ных, а также предприятия по производству, переработке, хранению, реализации пищевых продуктов и кормов животного и растительного происхождения.
Виды профессиональной деятельности: врачебная; экспертно-контрольная;
организационно-управленческая; производственно-технологическая; проектно-
консультативная; научно-исследовательская.
7
1. ТРЕБОВАНИЯ К УРОВНЮ ОСВОЕНИЯ ДИЦИПЛИНЫ
Процесс изучения дисциплины направлен на формирование следующих ком-
петенций в соответствии ФГОC ВО по данной специальности:
|
|
Компетенции |
|
|
Знать |
|
Уметь |
Иметь навыки |
|||||
индекс |
|
формулировка |
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
||||||
|
способностью и готовностью |
|
|
|
|
|
|
||||||
|
к |
оценке |
морфофункцио- |
патоморфологическую |
осуществлять ме- |
постановки лабора- |
|||||||
|
нальных, |
физиологических |
|||||||||||
|
характеристику |
воз- |
тоды лабораторной |
торного диагноза на |
|||||||||
ОПК-3 |
состояний и патологических |
||||||||||||
будителей вирусных |
диагностики вирус- |
вирусные инфекции |
|||||||||||
|
процессов в организме чело- |
||||||||||||
|
инфекций |
|
ных инфекций |
|
|||||||||
|
века для решения профес- |
|
|
||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
сиональных задач |
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
умением |
правильно пользо- |
|
|
|
|
|
|
|||||
|
ваться |
медико-технической |
|
|
|
|
|
|
|||||
|
и |
ветеринарной |
аппарату- |
|
|
пользоваться вете- |
|
||||||
|
рой, инструментарием |
и |
|
|
владения техникой |
||||||||
|
|
|
ринарной |
аппара- |
|||||||||
|
оборудованием в лаборатор- |
|
|
лабораторных ис- |
|||||||||
|
ветеринарную |
аппа- |
турой, |
инструмен- |
|||||||||
|
ных, диагностических и ле- |
следований с целью |
|||||||||||
ПК-2 |
ратуру, инструмента- |
тарием, |
|
оборудо- |
|||||||||
чебных |
целях и |
владением |
|
постановки диагно- |
|||||||||
|
рий, оборудование |
ванием |
в |
лабора- |
|||||||||
|
техникой клинического |
ис- |
за |
||||||||||
|
|
|
торных |
и |
диагно- |
||||||||
|
следования |
животных, |
на- |
|
|
|
|||||||
|
|
|
стических целях |
|
|||||||||
|
значением |
необходимого |
|
|
|
||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
лечения |
в |
соответствии |
с |
|
|
|
|
|
|
|||
|
поставленным диагнозом |
|
|
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
способностью и готовностью использовать нормативную документацию, принятую в ветеринарии и здравоохранении (законы Российской
ПК-12
Федерации, технические регламенты, международные и национальные стандарты, приказы, правила, рекомендации, указании, терминологию, действующие международные квалификации)
нормативную документацию, принятую в ветеринарии
использовать нормативную документацию, принятую в ветеринарии
владения нормативной документацией, принятой в ветеринарии
8
2.ТЕМЫ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ
РАЗДЕЛ 1. ОБЩАЯ ВИРУСОЛОГИЯ
Тема 1.1. Правила работы с вируссодержащим материалом. Правила и
методы получения и транспортировки вируссодержащего материла от боль-
ных животных и трупов
Цель: изучить правила работы с вируссодержащим материалом, способы по-
лучения патологического материала при вирусных инфекциях, правила его транс-
портировки от больных животных и трупов.
Содержание:
устройство вирусологической лаборатории;
техника безопасности в вирусологической лаборатории;
методы консервации вирусов;
патологический материал, направляемый в лабораторию при вирусных инфекциях;
упаковка вирусного материала для транспортировки в лабораторию;
транспортировка вирусного материала в лабораторию;
подготовка вирусного материала к исследованию (ткани и органы, смы-
вы, фекалии, моча, корочки и чешуйки, стенки афт, кровь).
Вирусологические отделы призваны осуществлять лабораторную диагности-
ку вирусных инфекций, контролировать заболеваемость животных, вызываемую вирусами, а также учитывать состояние и напряженность специфического пост-
инфекционного и поствакцинального противовирусного иммунитета, участвовать в проведении профилактических мероприятий в борьбе с вирусными заболева-
ниями животных. При организации и оборудовании вирусологических лаборато-
рий учитывается специфика работы с вирусами, клеточными культурами и кури-
ными эмбрионами, требующая строжайшей асептики.
Размещать лабораторию желательно в 2-хэтажном здании или в изолирован-
ном отсеке. На 1 этаже располагаются гардероб с индивидуальными шкафами,
санпропускник, санузлы, склад лабораторного оборудования, материалов и посу-
ды, приемник канализационных вод с установкой для их обезвреживания, вива-
9
рии для здоровых и подопытных животных с вытяжными шкафами, автоклавная и моечное помещение. 2 этаж отводят под лабораторные помещения: для культиви-
рования культур клеток, для серологических и вирусологических исследований,
для аппаратуры, под термостатную, комнаты для заведующего лабораторией и со-
трудников. Здание, состоящее не менее чем из 5-6 комнат. Под лабораторию от-
водят светлое помещение. Комнаты, где работают с вирусным материалом, долж-
ны быть хорошо освещены и состоять из двух отделений (предбоксника не менее
4 м2 и бокса не менее 9 м2), разделенных стеклянной перегородкой с дверью. В
боксах: только столы, стулья и принадлежности для работы. Поверхность столов покрывают стеклом, пластиком или нержавеющей сталью, а над рабочим местом устанавливают бактерицидные лампы, у входа в бокс резиновый дезковрик, про-
питанный дезраствором. В предбокснике стерильные халаты, шапочки, косынки,
маски и тапочки, оборудование, соответствующее назначению бокса (термостат,
микроскоп и инвертированный микроскоп, холодильник, водяную баню, центри-
фугу и пр.).
Площадь лаборатории делят на «заразную» зону - осуществляются манипу-
ляции с патогенными биологическими агентами и их хранение, и «чистую» зону -
не проводятся манипуляции с патогенными биологическими объектами.
В «чистой» зоне располагаются: гардероб для верхней одежды; помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, моечная, приготовле-
ние и розлив питательных сред и др.); стерилизационная; помещение с холодиль-
ной камерой или холодильниками для хранения питательных сред и диагностиче-
ских препаратов; комната отдыха и приема пищи; комната для работы с докумен-
тацией и литературой; кабинет заведующего; комната для надевания рабочей одежды; подсобные помещения; туалет.
В «заразной» зоне располагаются: помещение для приема и регистрации ма-
териала; боксы; комнаты для проведения бактериологических исследований;
комнаты для проведения микологических исследований; комнаты для проведения серологических исследований; комната для люминесцентной микроскопии; ком-
ната для проведения зооэнтомологических работ; комната для гельминтологиче-
10