2 курс / Нормальная физиология / Физиология бактерий

21

Характеристика колоний на плотной питательной среде

22

Унекоторых видов колоний есть свои названия, например:

S-тип колоний (от англ. Smooth – гладкий) – круглые, выпуклые колонии правильной формы с гладкой поверхностью и влажной консистенцией

R-тип колоний (от англ. Rough – шероховатый) – колонии с шероховатой поверхностью, неправильными краями и сухой консистенцией

M-тип колоний (от англ. Mucoid – слизистый) – слизистые колонии

Пигменты бактерий

Окраска колоний может быть связана как с пигментацией самих клеток, так и с выделением окрашенных веществ в питательную среду. Интенсивность образования пигментов зависит от состава питательной среды и условий культивирования микроорганизмов. Если пигмент не растворим в воде, окрашивается только культуральный налет, если же он водорастворим, окрашивается и питательная среда.

23

Пересев ЧК на скошенный агар для накопления

24

ТРЕТИЙ ЭТАП БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение ферментативной активности бактерий

Ферменты бактерий

Ферменты – специфические белковые катализаторы, присутствующие во всех живых клетках. Ферментативный спектр является таксономическим признаком, характерным для семейства, рода и

– в некоторых случаях – для видов. Поэтому определением спектра ферментативной активности пользуются при установлении таксономического положения бактерии.

Наличие экзоферментов можно определеить с помощью ДД-сред.

Классификация ферментов

По типу реакции:

1.Оксидоредуктазы: катализируют ОВР

2.Трансферазы: катализируют реакции переноса групп атомов

3.Гидролазы: катализируют гидролиз различных соединений

4.Лиазы: катализируют реакции отщепления от субстрата той или иной химической группы негидролитическими путями с образованием двойной связи или наоборот присоединение химической группы к двойным связям

5.Изомеразы: катализируют внутримолекулярные превращения

6.Лигазы (синтетазы) – катализируют соединение двух молекул, сопряженное с расщеплением пирофосфатной связи в молекуле АТФ.

26

Дифференциально-диагностические среды

Специальные смеси питательных веществ, применяемые для определения видовой принадлежности микробов и изучения их свойств. При росте бактерий на дифференциально-диагностических средах протекают химические процессы, обусловленные наличием у микробной клетки различных ферментов.

ДДсреды можно разделить на 4 основные группы:

Среды, содержащие белок и выявляющие способность микробов расщеплять белки

(протеолитическим свойства): свернутая лошадиная или бычья сыворотка, молоко

Среды для выявления способности микробов расщеплять углеводы и высокоатомные спирты (Эндо, Левина, «пестрый ряд», Гисса)

Среды, на которых выявляется способность микробов обесцвечивать красители, добавленные к бульону: метиленовый синий, лакмус и др.

Среды, выявляющие способность микробов усваивать вещества, которые не усваиваются другими микробами, например, агар Симмонса - среда с лимоннокислым натрием для отличия кишечной палочки, которая лишена способности

ассимилировать эту среду от других бактерий кишечной группы или среда с олеиновокислым натрией для дифференциации дифтерийной палочки от ложно дифтерийной и дифтероидов.

27

Помимо изучения ферментативной активности с помощью ДД сред для идентификации бактерий определяют ферменты, принимающие участие в процессах получения энергии: каталазу,

нитратредуктазу, оксидазу

Каталаза: расщепляет перекись водорода на молекулярный кислород и воду. Этим ферментом обладают облигантные аэробы и факультативные анаэробы. Для определения каталазы в пробирку с 2мл жидкой бактериальной культуры добавляют несколько капель 3% перекиси водорода. Появление пузырьков газа свидетельствует о наличии каталазы.

Нитратредуктаза: восстанавливает нитрат в нитрит. Определение нитритов проводят крахмалойодной реакцией, основанной на том, что в кислой среде нитриты окисляют йодистый калий с выделением йода, который при взаимодействии с крахмалом дает синее окрашивание.

Для этого культуру выращивают в питательном бульоне с добавлением в него нитрата калия, к 2-3 мл культуры добавляют 1 мл реактива, состоящего из равных объемов 10%-ной серной кислоты и раствора, содержащего в 100мл воды 0,5г йодистого калия и 1г крахмала.

Под действием нитратредуктазы нитрат переходит в нитрит, который вступает в реакцию с йодистым калием и серной кислотой. В результате реакции образуется чистый йод, который в присутствии крахмала дает синее окрашивание.

28

KNO3 → KNO2

2KI + 2H2SO4 + 2KNO2 → 2K2SO4 + I2 + 2NO + 2H2O

Оксидаза: имеется у бактерий с аэробным типом дыхания. Для ее определения на поверхность выросшей на плотной среде бактериальной культуры добавляют несколько капель 1%-ного спиртового раствора альфа-нафтола, 1%- ного водного раствора метола. Появление лиловой окраски свидетельствует о положительной реакции.

Помимо идентификации по биохимическим свойствам, при идентификации кокковых форм бактерий в третьем этапе бактериологического исследования определяют:

Активность плазмокоагулазы (в пробирку с 1мл цитратной плазмы кролика помещают 2-3 петли культуры стафилококка; пробирку помещают в термостат, результат фиксируют на следующие сутки, проверяя образование сгустка);

29

Чувствительность к желчи, антибиотику бацитрацину (для идентификации стрептококков), для чего делают пересев выделенной культуры на кровяной агар, на поверхность которого помещают диски, пропитанные вышеназванными веществами

МЕТОДЫ ВНУТРИВИДОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ. ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ МАРКИРОВАНИЕ

Эпидемиологическое маркирование – внутривидовая идентификация бактерий.

ЗАЧЕМ?

Для того чтобы выяснить источник инфекции, понять общий или разные источники инфекции у разных больных с одним и тем же заболеванием.

Одним из методов эпидемиологического маркирования является фаготипирование, при котором определяется фаговар бактерии внутри вида.

Фаговар – представитель бактерии определенного вида, который отличается от других представителей чувствительностью к типовым фагам.

Фаготипирование применяют при стафилококковых инфекциях, брюшном тифе и паратифозных заболеваниях.

Выделение бактерии одного фаготипа от разных больных указывает на общий источник заражения.

30

Методика фаготипирования:

бульонную культуру засевают газоном на чашку Петри с питательным агаром

Чашку подсушивают при температуре 36 градусов в течение 30 минут

Дно чашки расчерчивают на квадраты по числу используемых бактериофагов. В каждый квадрат петлей наносят каплю суспензии соответствующих диагностических, типоспецифических бактериофагов.

После подсыхания капель чашки инкубируют при температуре 37 градусов в течение суток.

После инкубации наблюдают зоны задержки/отсутствия роста бактерий в результате размножения бактериофагов, вызывающих лизис этих

бактерий.

Если картинка на чашках Петри у разных больных будет одинакова, это укажет нам на то, что у данных больных общий источник инфекции.